转录组高通量测序
RNA-Seq,是基于新一代测序技术的转录组学研究方法:首先提取生物样品的全部转录的RNA并进行mRNA富集,然后反转录为cDNA后进行的新一代高通量测序,在此基础上进行片段的拼接组装,从而可得到一个个的转录本,进而可以形成对该生物样品当前发育状态的基因表达状况的全局了解。不同阶段或部位的生物样品的RNA-Seq转录组进行比较分析,则可以在转录层面得到基因表达水平的变化,针对关键基因则可以进行代谢通路(Pathway)的构建。
样品类型:总RNA
样品类型:总RNA;血液;组织样本;细胞
样品浓度:≥50 ng/ul;
样品总量:>3ug;≥3ml;≥0.3g;≥3x106-107
样品纯度:OD260/280≥1.8,OD260/230≥1.0,260nm处有正常峰值。
RNA完整性: RIN≥7.0;28S/18S≥1.5;图谱基线无上抬;5S峰正常。
样品数:建议20个样本以上,尤其对于机理方面的研究建议根据不同患病
时期选取不同阶段的梯度样本。每个样本5个以上的重复。(样本数越多越容易获得功能基因) |